Materiales y métodos
Para el estudio inmunohistoquímico se incluyeron 6 ameloblastomas sólidos multiquísticos provenientes del Laboratorio de Patología Bucal de la Universidad Autónoma Metropolitana Xochimilco (México) y 5 gérmenes dentarios provenientes de la ]]>
Técnica de inmunohistoquímica
Se realizaron cortes de 2 μm de ]]>
Resultados
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Nuestro estudio nos permitió ver la inmunoexpresión de CK14 y CK19 en el epitelio y la negatividad del ectomesénquima, tanto en los gérmenes dentarios como en ameloblastomas. En el germen dentario, al observar el órgano del esmalte podemos ver como en los diferentes estratos la expresión de CK19 varía dependiendo del área de observación (Figura 1A). Por ejemplo, al analizar el epitelio interno del órgano del esmalte, la expresión de CK19 es más marcada en la membrana celular (en los extremos basal, ]]> (Figura2-A), mientras que en el epitelio externo la expresión es uniforme a nivel del citoplasma siguiendo la forma aplanada del cuerpo celular y por último en la lámina dentaria en involución se observó una tinción intensa y con un patrón homogéneo (Figura 3-A). Con respecto a CK14 la inmunotinción fue negativa a excepción de una ]]> (Figura 1-B y 2-B). Mientras que se evidenció mayor inmunotinción en la lámina dentaria (Figura3-B).
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]]> En cuanto a ameloblastomas, tres de los seis ameloblastomas sólidos/multiquísticos incluidos en este estudio, fueron del tipo folicular y tres fueron plexiformes. Todos los tumores mostraron positividad para CK14 y CK19. Se encontró mayor inmunopositividad para CK14 comparado con CK19, observándose inmunotinción focal para CK19 y predominantemente difusa para CK14.
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La positividad para CK19 fue predominantemente moderada, mostrando algunas variaciones en la positivad dependiendo de la zona tumoral, pues en el caso de los ameloblastomas foliculares se encontró inmunotinción en ]]> (ver figura 5). En el caso de los ameloblastomas plexiformes los plexos y cordones mostraron ]]>
La positividad para CK14 fue en general más intensa y menos focal, encontrándose distribuida uniformemente a lo largo de todos los cordones y plexos de epitelio odontogénico cuando se trató de la variante plexiforme, y cuando se trató de la variante folicular se evidenciaron los folículos e islas de epitelio odontogénico uniformemente positivos en todo el tumor.
]]> Discusión
Los patrones de expresión de citoqueratinas en el epitelio odontogénico han sido pobremente descriptos (10-16). Domingues et al. (10), en su estudio inmunohistoquímico demostraron que las células epiteliales del germen dental y los remanentes de la lámina dental son positivos para CK14 y CK19, con ligeros cambios en el patrón dependiendo de la fase de la odontogénesis. Nuestro estudio muestra resultados similares sobre todo para CK19, basándonos en los cambios que se van dando en el epitelio interno desde el ansa cervical al futuro borde incisal, ]]> Nuestros estudios concuerdan con estos hallazgos, pues vemos como el epitelio interno va aumentando la expresión de CK19 a medida que las células se van diferenciando a ameloblastos, también muestra que no sólo cambia la intensidad en la tinción de CK19, sino que también cambia la distribución de la ]]> (Figura 4). Domingues et al. plantean que la citoqueratina predominante en los restos de la lámina dental fue CK14, que tiñó fuertemente todas las células, y en su estudio CK19 apareció sólo en algunas células de la lámina dental, dando un patrón no homogéneo. En cambio, en nuestros preparados la tinción es intensa y con un patrón homogéneo para ]]> (Figura 3). Domingues et al. relatan que en el retículo estrellado también se vio la expresión de CK14, siendo más fuerte en la fase temprana de campana, con respecto a CK 19 también encontraron expresión pero ligeramente más débil. En nuestros casos no encontramos inmunoexpresión de CK14 probablemente debido a que pertenecen a estadios embriológicos más avanzados que el de campana temprana. Con respecto a CK19 encontramos una alta positividad en las prolongaciones siendo menor en el cuerpo celular (Figura 2). En cuanto al epitelio externo del órgano esmalte solo relatan que fue ]]>
Crivelini et al (11), Ferreira Lopes et al (12), Leon et al (13), Kasper et al (14), Heikinheimo et al (15) y Gao et al (16), aunque no describen en forma tan detallada, también estudiaron la expresión de CK19 en el germen dental. Encontraron CK19 en el órgano del esmalte (11-16) y en la lámina dental (11,13, 14). Crivelini et al y Leon et al, concuerdan con nuestros hallazgos, encontrando que CK14 es gradualmente ]]> (15).
Dado los cambios de la expresión de CK14 y CK19 en el epitelio interno del esmalte, algunos autores han sugerido que esta última puede ser considerada como un marcador de diferenciación ameloblástica (10, 11).
]]> Son varios los autores que se detienen en el estudio de estas dos citoqueratinas en tumores y entre estos en los tumores odontogénicos, ya sea para determinar su histogénesis o como diagnóstico diferencial con otras lesiones. Varios han demostrado que la expresión aberrante de CK14 y CK19 puede ser un hallazgo temprano en la patogénesis del carcinoma oral de células escamosas y pueden ser utilizados como un marcador de diferenciación tumoral (17-19). Varios estudios demuestran que la expresión de CK19 se ve aumentada acorde al grado y estadio del cáncer incluyendo a las neoplasias ]]> (20,21).
Nuestros estudios muestran que la expresión de CK19 fue predominantemente moderada, mostrando algunas variaciones en la positivad dependiendo de la zona tumoral, y en el caso de los ameloblastomas foliculares se encontró inmunotinción en las islas y folículos de epitelio odontogénico mostrando positividad citoplasmática tanto las células periféricas basales con polarización inversa como en las células centrales que recuerdan el retículo estrellado, aunque dicha tinción no fue ]]>
Algunos autores (12, 22, 23) estudiaron la expresión de CK19 en ameloblastomas y relatan que la encontraron en todas las células del tumor, no haciendo referencia a los cambios de intensidad que nosotros encontramos. Crivelini et al. relatan haber encontrado expresión de CK19 en algunos grupos de células con metaplasia escamosa y débil ]]>
En nuestros estudios, la positividad para CK14 fue en general más intensa y menos focal, encontrándose distribuida uniformemente a lo largo de todos los ]]> 11, 12, 22), pero no hay acuerdo en cuanto a si se presenta o no en las células internas, ya que algunos describen que hay negatividad en la parte central de las células que recuerdan el retículo estrellado (12), y otros que CK14 se expresa en ]]> 11, 22), mientras que nosotros, como ya relatamos, vemos la expresión de CK14 en todas las células.
Concluimos que, como relatan diversos autores, CK19 puede ser considerada como un marcador de utilidad en la diferenciación ameloblástica (10, 11, 20, 21), ya que cuando las células del epitelio interno se diferencian en ameloblastos tiende a predominar la inmunotinción intensamente positiva, mientras que a la vez disminuye la expresión de CK14, esto sugiere una participación de ]]>
Cabe señalar que dadas las limitaciones propias de este estudio tanto en ]]>
Referencias
1. Mass R, Bei M. The genetic control of early tooth development. Crit. Rev. Oral Biol. Med. 1997; 8(1): 4-39.
2. Thesleff I, Keränen S, Jernvall J. Enamel knots as signaling centers linking tooth morphogenesis and odontoblast differentiation. Adv. Dent. Res. 2001; 15: 14-18.
3. Oriolo AS, Wald FA, Ramsauer VP, Salas PJ. Intermediate filaments: a role in epithelial polarity. Exp. Cell Res. 2007; 313(10): 2255-2264.
4. Pan X, Hobbs RP, Coulombe PA. The expanding significance of keratin intermediate filaments in normal and diseased epithelia. Curr. Opin. Cell Biol. 2013; 25(1): 47-56.
5. Chung BM, Rotty JD, Coulombe PA. Networking galore: intermediate filaments and cell migration. Curr. Opi. Cell Biol. 2013; 25(5): 600-612.
6. Pallari HM, Eriksson JE. Intermediate filaments as signaling platforms Sci. STKE 2006; (366): 53
7. Kumamoto H. Molecular pathology of odontogenic tumors. J. Oral Pathol. Med. 2006; 35(2): 65-74.
8. Gardner DG, Heikinheimo K, Shear M, Philipsen HP, Coleman H. Odontogenic Tumours. In World Health Organization Classification of Tumors. Pathology and Genetics Head and Neck Tumors. Lyon: IARCPress; 2005. p283-327.
9. Schantz SP. Head and neck oncology research. Curr Opin Oncol. 1994; 6(3): 265-71.
10. Domingues MG, Jaeger MM, Araújo VC, Araújo NS. Expression of cytokeratins in human enamel organ. Eur. J. Oral Sci. 2000; 108(1): 43-47.
11. Crivelini MM, de Araújo VC, de Sousa SO, De Araújo NS. Cytokeratins in epithelia of odontogenic neoplasms. Oral Dis. 2003; 9(1): 1-6.
12. Ferreira Lopes F, Fontoura MC, do Amaral AL, Dantas EJ, Cavalcanti H, Batista L et al. Análise imuno-histoquímica das citoqueratinas em ameloblastoma e tumor odontogênico adenomatóide. J Bras. Patol. Med. Lab. 2005; 41(6): 425-430.
13. Leon JE, Mata GM, Fregnani ER, Carlos-Bregni R, de Almeida OP, Mosqueda-Taylor A et al. Clinicopathological and immunohistochemical study of 39 cases of Adenomatoid Odontogenic Tumour: a multicentric study. Oral Oncol. 2005; 41(8): 835–842.
14. Kasper M, Karsten U, Stosiek P, Moll R. Distribution of intermediate-filament proteins in the human enamel organ: unusually complex pattern of coexpression of cytokeratin polypeptides and vimentin. Differentiation 1989; 40(3): 207-214.
15. Heikinheimo K, Hormia M, Stenman G, Virtanen I, Happonen RP. Patterns of expression of intermediate filaments in ameloblastoma and human fetal tooth germ. J. Oral Pathol. Med. 1989; 18(5): 264-273.
16. Gao Z, Mackenzie IC, Cruchley AT, Williams DM, Leigh I, Lane EB. Cytokeratin expression of the odontogenic epithelia in dental follicles and developmental cysts. J. Oral. Pathol. Med. 1989; 18(2): 63-67.
17. Fillies T, Jogschies M, Kleinheinz J, Brandt B, Joos U, Buerger H. Cytokeratin alteration in oral leukoplakia and oral squamous cell carcinoma. Indian. J. Dent. Res. 2005; 16(1):6-11.
18. Zhong LP, Chen WT, Zhang CP, Zhang ZY. Increased CK19 expression correlated with pathologic differentiation grade and prognosis in oral squamous cell carcinoma patients. Oral. Surg. Oral. Med. Oral. Pathol. Oral. Radiol. Endod. 2007; 104(3): 377-84.
19. Ram Prassad VV, Nirmala NR, Kotian MS. Immunohistochemical evaluation of expression of cytokeratin 19 in different histological grades of leukoplakia and oral squamous cell carcinoma. Indian. J. Dent. Res. 2005; 16 (1): 6-11.
20. Babiker AY, Rahmani AH, Abdalaziz MS, Albutti A, Aly SM, Ahmed HG. Expressional analysis of p16 and cytokeratin19 protein in the genesis of oral squamous cell carcinoma patients. Int. J. Clin. Exp. Med. 2014 (6): 1524-30.
21. Schantz SP. Basic science advances in head and neck oncology: the past decade.. Curr Opin Oncol. 1994; 6(3): 265-71.
22. Pal SK, Sakamoto K, Aragaki T, Akashi T, Tamaquachi A. The expression profiles of acidic epithelial keratins in ameloblastoma. Oral Surg. Oral Med. Oral Pathol. Oral Radiol. 2013; 115(4): 523-531.
23. Fukumashi K, Enokiya Y, Inoue T. Cytoqueratins expression of constituting cells in ameloblastoma. Bull. Tokyo. Dent.. Coll. 2002; 43(1): 13-21