Veterinaria (Montevideo)

Identificación y caracterización de Staphylococcus resistentes a meticilina aislados de perros

Resumen Staphylococcus aureus y Staphylococcus pseudintermediusson los patógenos de mayor importancia tanto en humanos como en animales, siendo la resistencia a antibióticos muy frecuentes en cepas de ambas especies. Sin embargo, otras especies pertenecientes a este género podrían jugar un rol fundamental en la expansión de genes de resistencia, actuando como portadores y diseminadores de los mismos teniendo un gran impacto en medicina veterinaria. El objetivo de este trabajo fue detectar y caracterizar cepas de Staphylococcus spp. resistentes a meticilina obtenidos de perros sanos (portadores) y de perros con infecciones de oído y de piel. Mediante hisopado se muestrearon animales ingresados al Centro Hospitalario de la Facultad de Veterinaria de la UdelaR durante un año. La identificación a nivel de especie se realizó mediante secuenciación del gen del ARNr 16S y los perfiles de resistencia se determinaron mediante antibiograma. Se identificaron 67 aislamientos, en las especies: S. pseudintermedius, S. argenteus, S. cohnii, S. haemolyticus, S. epidermidis, S. arlettae, S. scheiflieri, S. xylosus y S. nepalensis. Siete cepas fueron resistentes a meticilina portando el gen mecA y se obtuvieron diez cepas que se catalogaron como MDR (multi drug resistence) ya que mostraron fenotipo resistente a más de tres clases de antibióticos. Podemos concluir que las condiciones para la transferencia de genes de resistencia a meticilina en caninos están dadas ya sea por la existencia de dichos genes y los elementos genéticos móviles en los que ellos son transportados así como también, por la presencia de cepas bacterianas capaces de incorporarlos.

Abstract Staphylococcus aureusandStaphylococcus pseudintermediusare important pathogens in both humans and animals mainly due to its high prevalence and their widespread antibiotic resistance. Other species belonging to this genus could play a fundamental role in the expansion of resistance genes, acting as carriers and disseminators; thus, this genus has a major impact on veterinary medicine. The aim of this work was to detect and characterize strains ofStaphylococcus spp. methicillin-resistant isolated from dogs of Montevideo, including healthy dogs (carriers) and diseased dogs (with ears and skin infections). Samples were collected from animals that where admitted to the Hospital Center of the School of Veterinary Medicine - Universidad de la República during a one year period. Identification at the species level was carried out through 16S rRNA gene sequencing and the resistance profiles were determined by antibiogram. Sixty seven isolates belonging to nine species were identified: S. pseudintermedius, S. argenteus, S. cohnii, S. haemolyticus, S. epidermidis, S. arlettae, S. scheiflieri, S. xylosus and S. nepalensis. Seven strains were resistant to methicillin, and all of these were found to carry the mecA gene. Ten other strains were classified as MDR (multi drug resistance) since phenotypic studies indicated resistance to more than three classes of antibiotics. We conclude that the conditions for the transfer of methicillin resistance genes in canines are given by the existence of genes and the mobile genetic elements in which they are transported, as well as the presence of bacterial strains able to incorporate them.

Aflatoxinas en alimentos y leche de vacas de 18 establecimientos comerciales de las regiones centro-sur y este de Uruguay

Resumen: Las micotoxinas, metabolitos secundarios producidos por hongos toxicogénicos que contaminan alimentos destinados al hombre y/o animales que una vez ingeridos pueden ocasionar problemas en la salud. Existen más de 250 micotoxinas, siendo las aflatoxinas una de las más estudiadas ya que son potenciales carcinogénicos. Las aflatoxinas consumidas por los animales son metabolizadas y excretadas en parte por leche como aflatoxina M1, representando un riesgo potencial para humanos. La fuente de aflatoxinas para los animales son los alimentos, por ello los niveles máximos permitidos están regulados, así como la presencia de aflatoxina M1 en leche y derivados. El objetivo del presente estudio fue evaluar 18 establecimientos lecheros comerciales de Uruguay, la presencia natural de aflatoxinas en alimentos destinados a vacas lecheras en producción y su correlación con la presencia de aflatoxina M1 en la leche de los animales que estaban consumiendo esos alimentos. Se seleccionaron establecimientos comerciales remitentes de las zonas centro-sur y este del Uruguay, se tomaron muestras de los alimentos que consumían los animales y de la leche del tanque de frío al momento de la visita. Las aflatoxinas fueron cuantificadas mediante la técnica de Elisa, obteniéndose el 100% de muestras de alimento contaminadas y el 91,8% de muestras de leche con niveles de aflatoxinas. Los niveles de aflatoxinas no se correlacionaron con los de aflatoxina M1. La aflatoxina M1 determinada en este estudio no representó riesgo para la salud ya que no superó los niveles máximos permitidos para el consumo en Uruguay.

Summary: Mycotoxins are secondary metabolites produced by toxicogenic fungi species. They can contaminate humans and animals’ food and once ingested can cause health harms. There are more than 250 mycotoxins, being aflatoxins one of the most studied due to their potential carcinogenic effect. It is known that the aflatoxins consumed by animals are metabolized and excreted in part by milk as aflatoxin M1, representing a potential risk for human health. Aflatoxins source for animals is feed, therefore, the maximum permitted levels are regulated, as well as the presence of aflatoxin M1 in milk and derivatives. The aim of the present study was to evaluate the natural presence of aflatoxins in the feeds destined to dairy cows in production in 18 commercial dairy farms of Uruguay. It also aimed to determine the correlation between the consumption of those feeds and the presence of aflatoxin M1 in the milk of the animals. In order to achieve this objective, feed and milk samples were taken randomly from 18 dairy farms located in the south central area and the east region of Uruguay. Milk was taken from the cold tank. Aflatoxins were quantified by Elisa technique. The totally of the feed samples and 91.8% of the milk samples were contaminated with some aflatoxin levels. The levels of aflatoxins did not correlate with those of aflatoxin M1. The levels of aflatoxin M1 in milk did not exceed the maximum consumption levels allowed in Uruguay, thus did not represent a risk for human health.

Evaluación de dos cruzamientos experimentales de tres vías de pollo campero bajo dos manejos de la alimentación

Resumen: El pollo campero es un ave con menor velocidad de crecimiento y mayor rusticidad que el pollo parrillero industrial, y está destinado a sistemas de producción semi-intensiva que contemplan aspectos vinculados con el bienestar animal. El esquema tradicional de alimentación de estas aves incluye la utilización de tres tipos de alimento -“Iniciador”, “Crecimiento” y “Terminador”- formulados específicamente para cada una de las etapas. Dado que es complejo manejar tres tipos de alimento en explotaciones pequeñas, los productores se plantean la posibilidad de manejar sólo dos: “Iniciador” y “Terminador”. El objetivo de este trabajo fue caracterizar el comportamiento productivo y la calidad física de la carne de machos de dos cruzamientos experimentales de tres vías de pollo campero -Campero Casilda y Campero Pergamino- como alternativas frente al cruzamiento simple Campero INTA, bajo dos manejos de alimentación (a) tradicional de tres raciones y tres dietas y (b) alternativo con sólo dos raciones (iniciador y terminador) y cinco dietas. Los dos cruzamientos experimentales se desempeñaron de manera equivalente en relación con la mayoría de las variables analizadas y presentaron mayor peso que Campero INTA lo que los transforma en opciones válidas para sistemas de avicultura alternativa a la industrial. La ausencia de modificaciones de trascendencia productiva al reemplazar el alimento crecimiento por combinaciones de iniciador y terminador indica la posibilidad de obviar su inclusión en el esquema de alimentación, simplificando así la producción de este tipo de aves.

Summary: Campero chicken is a type of meat producing bird with a lower body weight gain and a greater rusticity than their industrial broilers counterparts, intended for semi-intensive production systems that prioritizes aspects related to animal welfare. The traditional feeding scheme includes the use of three types of diets specially formulated for this purpose (Starter, Grower and Finisher). Taking into account the complexity of managing three types of food in small farms, the producers consider the possibility of managing only two: "Starter" and "Finisher". The aim of this work was to characterize the productive behavior and the physical quality of the meat, of males of two three-way experimental hybrids of free range chickens -Campero Casilda y Campero Pergamino- as alternatives to the two-way cross Campero INTA. Both experimental crosses were evaluated under two feeding regimens (a) traditional, with three diets (Starter, Grower and Finisher) and three rations, and (b) alternative, with only two diets (Starter and Finisher) combined in five rations. The experimental crosses performed in an equivalent manner for almost all traits, being both heavier than Campero INTA, which transforms them into valid options for poultry systems alternative to the industrial one. The lack of meaningful productive differences when Grower feed was replaced by three Starter + Finisher combinations, indicates the feasibility of avoiding its inclusion in the feeding scheme, thus simplifying the production of this type of free-range birds.

Estudio serológico frente a los virus respiratorios en terneros en un sistema semi-intensivo y su relación con la sintomatología respiratoria

Resumen: Las enfermedades respiratorias de los terneros son un problema sanitario importante debido a que cursan con altas tasas de morbilidad y mortalidad, originando grandes pérdidas económicas. El objetivo de este estudio fue determinar la presencia de anticuerpos séricos frente a los principales agentes etiológicos virales relacionados con la bronconeumonía en bovinos (virus de la diarrea viral bovina, herpesvirus bovino tipo-1 y virus respiratorio sincitial bovino), evaluando la asociación entre la presencia de anticuerpos y las manifestaciones clínicas. Se estudiaron 63 terneros pertenecientes a dos rebaños del estado de Sao Paulo (Brasil). Los animales fueron divididos en dos grupos: animales sanos y enfermos con sintomatología respiratoria después del examen físico. Se extrajo sangre para la posterior detección de anticuerpos en suero por neutralización viral y se estudió la asociación entre los signos clínicos y los hallazgos serológicos. Los anticuerpos frente al virus de la diarrea viral bovina, herpesvirus bovino tipo-1 y virus respiratorio sincitial bovino se detectaron respectivamente en el 57,10%, el 66,70% y el 93,70% de las muestras. Se observó una mayor frecuencia de anticuerpos contra el virus de la diarrea viral bovina en animales con exudado nasal seroso / mucoso (P = 0,01). Los animales deshidratados (P = 0,008) y aquellos con temperatura rectal por encima de 39,5 ºC (P = 0,03) presentaron con mayor frecuencia anticuerpos frente al virus respiratorio sincitial bovino. El presente trabajo presentó resultados de seropositividad más elevados a los encontrados en otros estudios realizados en granjas con un sistema de manejo extensivo, confirmando la importancia del manejo en la transmisión de estos microorganismos.

Summary: Respiratory diseases are a major health problem due to the high morbidity and mortality rates, with great economic losses. The aim of this study was to determine the frequency of antibodies against the main viral etiological agents related to bronchopneumonia in cattle (bovine viral diarrhea virus, bovine herpesvirus type-1 and bovine respiratory syncytial virus), searching for associations between these agents and the clinical signs observed. We studied 63 calves from two herds from São Paulo, Brazil. After physical examination, the calves were divided into healthy calves and calves with respiratory disease. Serum was obtained for subsequent detection of antibodies by viral neutralization. The association between clinical signs and serological findings was studied. Antibodies against bovine viral diarrhea virus, bovine herpesvirus type-1 and bovine respiratory syncytial virus were detected in 57.10%, 66.70% and 93.70% of the samples. A higher frequency of antibodies against bovine viral diarrhea virus was observed in animals with serous / mucous nasal discharge (P = 0.01). The dehydrated animals (P = 0.008) and those with a rectal temperature above 39.5 ºC (P = 0.03) presented a higher frequency of antibodies against the bovine respiratory syncytial virus. The present work presented results superior to those found in studies in farms with extensive system, confirming the importance of management in the transmission of microorganisms.

Adaptación de las condiciones de tamponamiento de un sistema de fermentación in vitro para el estudio de la acidosis ruminal

Resumen: La acidosis ruminal es una importante enfermedad de la producción del ganado bovino. La puesta a punto de técnicas in vitro adecuadas permitirían reducir costos y acelerar los tiempos logrando resultados con el fin de incrementar la producción respetando el bienestar animal. En el presente estudio se modificó el método “gas-in vitro” empleando diferentes soluciones tampón (salivas artificiales) para evaluar su efecto amortiguador sometiéndolas a una situación simulada de acidosis ruminal. Se realizaron tres ensayos. Se testeó primero una saliva artificial con alto nivel de tamponamiento (SA01) comprobando que era poco apropiada para la simulación de la acidosis. Se estudiaron a continuación cinco variaciones en la composición de la SA01 y finalmente se testaron dos salivas con una composición y elaboración diferente. Se estudiaron las diferencias en la evolución del pH en los sistemas de fermentación a través de su comparación en cuatro tiempos de fermentación (0, 4, 12 y 24h) con tratamientos controles con sistemas tamponados sin desencadenar la acidosis simulada mediante t de Student (α=0.05) y por la comparación de los parámetros obtenidos mediante una regresión no lineal de los valores obtenidos de cada tratamiento ajustándola a un modelo logarítmico descendente. Si bien las tres salivas artificiales estudiadas en el último experimento podrían cumplir con el objetivo buscado, la denominada SA03, con menor cantidad de bicarbonatos y mayor proporción de fosfatos, fue la que presentó un mejor comportamiento para el análisis de situaciones de acidosis.

Summary: Ruminal acidosis is an important disease of cattle production. The development of in vitro techniques suitable for its study would allow to reduce costs and accelerate the times to achieve results useful to contribute to the increase of production, minimally affecting animal welfare. In the present study, a "gas-in vitro" method was modified using different buffer solutions (artificial saliva) to assess their buffering effect in simulated ruminal acidosis situations. Three successive tests were carried out. An artificial saliva formulated for studies that required a high buffering level (SA01) was first tested, verifying that it was not appropriate for the simulation of acidosis. Five variations in the composition of saliva SA01 were then studied and finally two saliva were tested with a different composition and elaboration methods. Differences in the evolution of pH in the fermentation systems were studied through their comparison in four times of fermentation (0, 4, 12 and 24h) with control treatments with buffered systems without triggering the simulated acidosis by Student's t (α = 0.05) and through the comparison of the parameters obtained by means of a non-linear regression of the values obtained from each treatment, adjusting it to a descending logarithmic model. Although the three artificial salivas studied in the last experiment could meet the sought objective, the artificial saliva SA03, with a lower amount of bicarbonate and higher proportion of phosphates, was the one that presented the best behavior for the analysis of acidosis situations.

Respuesta inmune humoral contra toxoides de Clostridium perfringens en vaquillonas Holando seropositivas el virus de la Leucosis Bovina Enzoótica

Resumen: Leucosis Bovina Enzoótica es la principal virosis que afecta al ganado lechero en Uruguay. La infección subclínica causa disfunciones importantes del sistema inmune impactando directamente en la salud animal. El objetivo de este estudio fue evaluar si la respuesta inmune humoral de vaquillonas holando serológicamente positivas al virus de la leucosis bovina (BLV) es afectada frente a la inmunización a campo con una vacuna clostridial. Se realizó el seguimiento de la respuesta inmune humoral posvacunación durante 12 meses de un grupo de animales serológicamente positivos (n=29) y otro serológicamente negativos a BLV(n=19). Los animales recibieron tres dosis de una vacuna comercial contra Clostridios (días 0, 30, 173) y se extrajeron muestras de sangre los días 0, 30, 60, 90, 180 y 365 luego de la primovacunación. Se cuantificaron anticuerpos totales mediante ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISAs) contra las toxinas alfa, beta y épsilon del C. perfringens y anticuerpos neutralizantes mediante Seroneutralización (SN) in vitro para la toxina épsilon. Los resultados evidenciaron una baja respuesta de anticuerpos neutralizantes contra la toxina épsilon utilizando la técnica de SN in vitro lo cual no se correlacionó con los resultados obtenidos en el ELISA comercial. La respuesta de anticuerpos totales utilizando ELISA comerciales fue variable según el toxoide evaluado. No se evidenciaron diferencias significativas en la concentración de anticuerpos contra Clostridium perfringens entre animales seropositivos y seronegativos a BLV. La utilidad de los test de ELISA comerciales para analizar la respuesta a la vacunación contra clostridiosis, debe ser discutida y analizada a partir de los resultados encontrados en este ensayo.

Summary: Enzootic bovine leukosis is the main virosis that affects dairy cattle in Uruguay. The subclinical infection causes importants dysfunctions in the immune system impacting directly in the animal health. The aim of this study was to evaluate the immune response of Holstein heifers with positive serology against Leukosis bovine virus (BLV) when they were ordinary immunized against Clostridium perfringens. It was evaluated a seropositive group to BLV animals (n=29) and other seronegative group (n=19) during twelve months. The animals recived three immunizations with a commercial polyvalent vaccine against several Clostridios (days 0, 30, 173). Blood samples were taken in days 0, 30, 60, 90, 180 y 360 post vaccination and then the humoral immune response was analyzed through the use of the ELISA technique to quantify total antibodies against C. perfringens toxins alfa, beta and épsilon. Besides it was in vitro analyzed the amount of neutralizing antibodies against epsilon toxin using the reference technique, seroneutralization. The results demonstrated a low response of neutralizing antibodies to epsilon toxin by SN technique showing no correlation with the results obtained by the commercial ELISA kit. Total antibodies response evaluated using commercial ELISA Kit was variable according to the studied toxoid. No significant differences were found in the immune response against Clostridium perfringens vaccination between BLV seropositive and seronegative animals using the techniques mentioned. The commercial ELISA kit use to analyze the response to vaccination against Clostridiosis, must be discussed and analyzed according to the results of this work.

Intoxicación por Cannabis en Pequeños Animales. Revisión

Resumen El Cannabis es una de las drogas más consumidas a nivel mundial, Uruguay en particular es el décimo país con mayor consumo per cápita. Dado que en el país se ha regulado legalmente el mercado y consumo de Cannabis tanto de uso recreativo como medicinal y ya que es posible tener acceso a productos medicinales y flores de Cannabis en las farmacias de nuestro país, es esperable que exista mayor exposición accidental de los animales domésticos a estos productos. Así mismo, la legalización ayuda a que los propietarios se sientan seguros a la hora de reconocer que sus mascotas pueden haber tenido acceso a productos a base de Cannabis. Por lo tanto, resulta menester conocer detalladamente la toxicodinamia, toxicocinética, signos clínicos, diagnóstico y tratamiento de la intoxicación por Cannabis en pequeños animales.

Summary Cannabis is one of the most consumed drugs worldwide, being Uruguay the tenth country with higher consume per capita. Due to the legally regulation of the medical and recreational Cannabis market and consume and the possibility to buy medicinal products and Cannabis flowers in the pharmacies of our country, the enhancement of accidental exposure to Cannabis products in small animals is expected. Furthermore, the legalization helps pets’ owners to feel confident to recognize that their animals could have ingested Cannabis products. Hence, it is fundamental to be aware in the toxicodynamic, toxicokinetic, clinical signs, diagnosis and treatment of Cannabis intoxication in small animals.

Descripción de un caso de pitiosis cutánea equina y su diagnóstico mediante diversas técnicas

Resumen: La pitiosis es una enfermedad ampliamente distribuida a nivel mundial causada por Pythium insidiosum. Esta es transmitida y propagada en ambientes semiacuáticos afectando principalmente a equinos, caninos, felinos, bovinos y el hombre. En el departamento de Paysandú, Uruguay, en el mes de Mayo 2017 se registró un caso de pitiosis en un equino hembra raza Criolla de 24 años. Se realizó la extirpación quirúrgica de una extensa lesión circular ubicada en zona abdominal. Macroscópicamente se observó tejido de granulación, áreas multifocales de necrosis con contenido supurativo hemorrágico, concreciones del tipo pastoso a gredoso de color blanco amarillento. Al examen histopatológico por medio de la tinción de H&E se destacaba ulceración difusa de la epidermis; con severa proliferación de tejido de granulación, abundante tejido conjuntivo, neovascularización, áreas multifocales de necrosis eosinofílica rodeada por abundantes polimorfonucleares, principalmente eosinófilos, y macrófagos en dermis superficial y profunda. Dentro de las áreas de necrosis se observó la presencia de hifas coloreadas positivamente con la coloración argéntica de Grocott. Se obtuvo inmunomarcación positiva para P. insidiosum. En el cultivo del material se aislaron colonias de color blanquecino y crecimiento radial con desarrollo de micelios aéreos luego de 48 horas. Se confirmó el aislamiento de P. insidiosum mediante la inducción de zooesporas y la caracterización de las mismas. Por medio de la reacción de PCR-anidado se amplificó la región ITS (ITS1, 5.8S, ITS2) y en una segunda reacción se amplió el gen específico para P. insidiosum de la región ITS1. La secuencia obtenida fue comparada con la registrada en el GenBank confirmando una homología de 100 % con P. insidiosum.

Summary: Pythiosis is a disease widely distributed worldwide caused by Pythium insidiosum. It is transmitted and propagated in semi-aquatic environments, mainly affecting equines, canines, felines, cattle and humans. In Paysandú County, Uruguay, in the month of May 2017, a case of pitiosis was registered in a 24-year-old Creole breed female equine. An extensive circular lesion located in the ventral abdominal area was surgically removed. Macroscopically, it was observed granulation tissue, multifocal areas of necrosis with suppurative hemorrhagic content and yellowish-white pasty to chalky concretions. At the histopathological examination with H&E stain there was of notice diffuse ulceration of the epidermis; in superficial and deep dermisthere were severe proliferation of connective tissue, neovascularization, multifocal areas of necrosis surrounded by infiltration of polymorphonuclears, mainly eosinophils, and macrophages. Inside of the areas of necrosis there was presence of hyphae stained positively by the argentic Grocott stain. Positive immunostaining was obtained for P. insidiosum. In the culture of the fresh material, colonies of whitish color and radial growth were isolated with the development of aerial mycelia after 48 hours. The isolation of P. insidiosum was confirmed by the induction of zoospores and the characterization of them. The ITS region (ITS1, 5.8S, ITS2) was amplified by the nested PCR reaction and in a second reaction the gene specific for P. insidiosum from the ITS1 region was amplified. The sequence obtained was compared with that registered in GenBank confirming a 100% homology with P. insidiosum.